Απαντήσεις στις 13 ερωτήσεις του κεφαλαίου 11 (το κεφ. 10, 2 σελίδες εισαγωγής, δεν έχει ερωτήσεις).
Ερώτηση: Τι είναι ιζηματινοαντίδραση;
Απάντηση:
Σύνοψη: (ενδεικτική) Ιζηματινοαντίδραση = ένωση διαλυτού αντιγόνου με το ομόλογο αντίσωμα (ιζηματίνη) και σχηματισμός ορατού ιζήματος· ποιοτική ή ποσοτική, σε υγρό μέσο ή σε πηκτή.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Ποιες είναι οι φάσεις μιας ιζηματινοαντίδρασης;
Απάντηση:
Η ιζηματινοαντίδραση γίνεται σε δύο φάσεις (σελ. 131):
Για να ολοκληρωθεί η δεύτερη φάση χρειάζονται κατάλληλο pH, θερμοκρασία, ηλεκτρολύτης και κυρίως άριστη αναλογία αντιγόνου-αντισώματος.
Σύνοψη: (ενδεικτική) 1η φάση: ταχεία ένωση Ag-Ab → μικρά διαλυτά συμπλέγματα· 2η φάση: σύνδεση των συμπλεγμάτων σε μεγάλα αδιάλυτα, που με ηλεκτρολύτη καθιζάνουν → ορατό ίζημα.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Ποια είναι η απαραίτητη προϋπόθεση για το σχηματισμό ορατού ιζήματος σε μια ιζηματινοαντίδραση;
Απάντηση:
Σύνοψη: (ενδεικτική) Άριστη αναλογία (ισορροπία) αντιγόνου-αντισώματος — σε περίσσεια αντισώματος ή αντιγόνου δεν σχηματίζεται ίζημα (καμπύλη Heidelberger-Kendall, 3 ζώνες)· επιπλέον κατάλληλο pH, θερμοκρασία, ηλεκτρολύτης.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Ποιες ιζηματινοαντιδράσεις γίνονται σε υγρό μέσο;
Απάντηση:
Σύνοψη: (ενδεικτική) Δοκιμή του δακτυλίου (ring test — λευκός δακτύλιος στο σημείο επαφής αντισώματος-αντιγόνου, ποιοτική, ΕΝΥ/στρεπτόκοκκοι) και νεφελομετρία (η ευρύτερα χρησιμοποιούμενη σήμερα).
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Ποιες ιζηματινοαντιδράσεις γίνονται σε πηκτή (γέλη);
Απάντηση:
Σύνοψη: (ενδεικτική) Απλή διάχυση προς μία κατεύθυνση, διπλή διάχυση προς μία κατεύθυνση, διπλή διάχυση προς δύο κατευθύνσεις (Ouchterlony), κυκλοτερής ανοσοδιάχυση (Mancini), ανοσοηλεκτροφόρηση και ανοσοκαθήλωση.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Πώς γίνεται η απλή διάχυση προς μια κατεύθυνση;
Απάντηση:
Απλή διάχυση προς μία κατεύθυνση (σχ. 11.3):
Η μέθοδος μπορεί να γίνει και αντίστροφα (σχ. 11.4): ενσωματώνεται το αντιγόνο στο άγαρ και επιστιβάζεται το διάλυμα του αντισώματος, το οποίο διαχέεται και σχηματίζει τη γραμμή καθίζησης στο σημείο της άριστης αναλογίας. Μόνο το ένα αντιδραστήριο κινείται — προς μία κατεύθυνση (σελ. 133).
Σύνοψη: (ενδεικτική) Σωληνάριο με άγαρ που περιέχει το αντίσωμα· επιστιβάζεται το διάλυμα αντιγόνου, που διαχέεται προς τα κάτω με μειούμενη πυκνότητα και στο σημείο άριστης αναλογίας δίνει θολερή γραμμή καθίζησης· γίνεται και αντίστροφα (αντιγόνο στο άγαρ, αντίσωμα από πάνω).
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Πώς γίνεται η διπλή διάχυση προς μια κατεύθυνση;
Απάντηση:
Διπλή διάχυση προς μία κατεύθυνση (σχ. 11.5, σελ. 134):
Το αντίσωμα και το αντιγόνο διαχέονται ταυτόχρονα («διπλή» διάχυση) — το ένα προς τα πάνω, το άλλο προς τα κάτω — και συναντώνται στη μεσαία στιβάδα του σκέτου άγαρ· στο σημείο που θα συναντηθούν σε άριστη αναλογία σχηματίζουν τη γραμμή καθίζησης. Η διάχυση γίνεται κατά μήκος ενός άξονα (μία κατεύθυνση).
Σύνοψη: (ενδεικτική) Σωληνάριο: κάτω άγαρ με αντίσωμα, ενδιάμεσα στιβάδα σκέτου άγαρ, πάνω το διάλυμα αντιγόνου· αντίσωμα και αντιγόνο διαχέονται ταυτόχρονα (πάνω/κάτω) και σχηματίζουν γραμμή καθίζησης στη μεσαία στιβάδα, στο σημείο άριστης αναλογίας.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Πώς γίνεται η διπλή διάχυση προς δυο κατευθύνσεις (Ouchterlony);
Απάντηση:
Η διπλή διάχυση προς δύο κατευθύνσεις (Ouchterlony) γίνεται σε τρυβλίο ή γυάλινη πλάκα (σχ. 11.6, σελ. 135):
Το αντίσωμα και το αντιγόνο διαχέονται από τις οπές στις οποίες βρίσκονται, ακτινωτά προς όλες τις κατευθύνσεις (γι' αυτό «δύο κατευθύνσεις» — στο επίπεδο της πλάκας). Στο σημείο που θα συναντηθούν σε άριστη αναλογία ανάμεσα στις δύο οπές σχηματίζεται η γραμμή καθίζησης (θολερή γραμμή αδιάλυτων συμπλεγμάτων), που μπορεί να γίνει πιο εμφανής με χρωστική πρωτεϊνών. Τα αντιδραστήρια υπάρχουν στο εμπόριο και η εξέταση γίνεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
Σύνοψη: (ενδεικτική) Τρυβλίο/πλάκα με άγαρ και δύο οπές — αντίσωμα στη μία, αντιγόνο στην άλλη· διαχέονται και τα δύο από τις οπές και στο σημείο άριστης αναλογίας ανάμεσά τους σχηματίζεται γραμμή καθίζησης.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Ποιες εφαρμογές της Ouchterlony γνωρίζετε;
Απάντηση:
Η μέθοδος Ouchterlony εφαρμόζεται συχνά (σελ. 135):
Τα αντιδραστήρια (πλάκες με άγαρ, αντιγόνα ΕΝΑ, αντιοροί) διατίθενται στο εμπόριο και η εξέταση γίνεται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
Σύνοψη: (ενδεικτική) Ανίχνευση ειδικών αντι-ΕΝΑ αντισωμάτων (Sm, nRNP, Ro, La, Scl-70) σε νοσήματα κολλαγόνου-αυτοάνοσα· στη μικροβιολογία για αντισώματα έναντι μικροβίων.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Πώς γίνεται η κυκλοτερής ανοσοδιάχυση (Mancini);
Απάντηση:
Κυκλοτερής ανοσοδιάχυση (Mancini) (σχ. 11.7, σελ. 136):
Κοντά στην οπή το αντιγόνο είναι σε μεγάλη συγκέντρωση (περίσσεια) και δεν σχηματίζεται ίζημα· όσο απομακρύνεται, η πυκνότητά του ελαττώνεται και στο σημείο άριστης αναλογίας σχηματίζεται ίζημα με μορφή δακτυλίου (δακτύλιος καθίζησης) με κέντρο την οπή. Η διάμετρος του δακτυλίου είναι ανάλογη με την ποσότητα του αντιγόνου που τοποθετήθηκε — όσο περισσότερο αντιγόνο, τόσο μεγαλύτερος ο δακτύλιος. Έτσι η μέθοδος είναι ποσοτική και χρησιμοποιήθηκε ευρύτατα για τον προσδιορισμό των ανοσοσφαιρινών IgG, IgA, IgM (και παραγόντων συμπληρώματος), με ξεχωριστή πλάκα με τον αντίστοιχο αντιορό για καθεμία· σήμερα έχει αντικατασταθεί από τη νεφελομετρία.
Σύνοψη: (ενδεικτική) Άγαρ με ομοιόμορφα ενσωματωμένο αντίσωμα σε πλάκα· οπή με το διάλυμα αντιγόνου, που διαχέεται κυκλικά· κοντά περίσσεια (όχι ίζημα), στην άριστη αναλογία δακτύλιος καθίζησης με διάμετρο ανάλογη της ποσότητας του αντιγόνου → ποσοτική μέτρηση (IgG, IgA, IgM).
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Περιγράψτε τη μέτρηση της IgG με τη μέθοδο Mancini.
Απάντηση:
Μέτρηση της IgG με τη μέθοδο Mancini (σχ. 11.8-11.9, σελ. 136-138):
Με τον ίδιο τρόπο προσδιορίζονται η IgA και η IgM, σε ξεχωριστά τρυβλία με ενσωματωμένο αντι-IgA ή αντι-IgM αντιορό. Σήμερα η μέθοδος έχει αντικατασταθεί από τη νεφελομετρία (ακριβέστερη, ευαισθητότερη, γρηγορότερη).
Σύνοψη: (ενδεικτική) Τρυβλίο με άγαρ + αντι-IgG· οπές: εξεταζόμενος ορός και διαδοχικές αραιώσεις standard IgG· διάχυση → δακτύλιοι καθίζησης· από τις διαμέτρους των standards καμπύλη αναφοράς → από τη διάμετρο του δείγματος η συγκέντρωση IgG· ομοίως IgA, IgM· σήμερα νεφελομετρία.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Πώς γίνεται η ανοσοηλεκτροφόρηση;
Απάντηση:
Η ανοσοηλεκτροφόρηση συνδυάζει τον ηλεκτροφορητικό διαχωρισμό των πρωτεϊνών με την ανοσολογική τους αναγνώριση από αντιορούς, ώστε να γίνει ταυτοποίηση και έλεγχός τους (σχ. 11.10α, σελ. 138):
Σήμερα έχει σχεδόν αντικατασταθεί από την ανοσοκαθήλωση, όπου ο αντιορός απλώνεται σε όλη την επιφάνεια της ηλεκτροφόρησης και δίνει γραμμή-ζώνη καθίζησης (στενή, έντονη ζώνη = μονοκλωνική), με μεγαλύτερη ευαισθησία και σαφήνεια.
Σύνοψη: (ενδεικτική) 1. Ηλεκτροφόρηση του ορού σε αγαρόζη· 2. αυλάκι παράλληλα στη διαδρομή με αντιορό (αντι-IgG/IgA/IgM/κ/λ)· 3. επώαση-διάχυση → τόξα καθίζησης (χρωστική)· 4. σύγκριση με φυσιολογικούς μάρτυρες — ανώμαλο τόξο = μονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη (τύπος π.χ. IgA κ)· σήμερα ανοσοκαθήλωση.
Κριτήρια αξιολόγησης:
Ερώτηση: Τι ανιχνεύουμε με την ανοσοηλεκτροφόρηση;
Απάντηση:
Με την ανοσοηλεκτροφόρηση (και την ανοσοκαθήλωση) ανιχνεύουμε την ύπαρξη μονοκλωνικής πρωτεΐνης (παραπρωτεΐνης) στον ορό ή σε άλλα βιολογικά υγρά (π.χ. ούρα) του ασθενούς και καθορίζουμε τον τύπο της: ελέγχοντας τις τρεις τάξεις IgG, IgA, IgM (σπανίως IgD, IgE) και τις ελαφρές αλυσίδες κ και λ με τους αντίστοιχους αντιορούς, εντοπίζουμε π.χ. μονοκλωνική πρωτεΐνη τύπου IgA κ ή IgG κ (φωτ. 11.1β — πολλαπλό μυέλωμα), ή μονοκλωνική μόνο ελαφρών αλυσίδων κ ή λ, όπως στα ούρα το λεύκωμα Bence Jones.
Αξιολόγηση: η ανίχνευση μονοκλωνικής πρωτεΐνης παρατηρείται στις παραπρωτεϊναιμίες (μονοκλωνικές γαμμαπάθειες), που μπορεί να είναι α) κακοήθεις (πολλαπλό μυέλωμα, μακροσφαιριναιμία Waldenström κ.ά.), β) ακαθόριστης σημασίας (σε ηλικιωμένους χωρίς άλλα ευρήματα — χρειάζονται μακροχρόνια παρακολούθηση μήπως εξελιχθούν σε μυέλωμα) ή γ) δευτεροπαθείς (σε χρόνια λοιμώδη, αυτοάνοσα νοσήματα, νεοπλάσματα) (σελ. 138-142).
Σύνοψη: (ενδεικτική) Την ύπαρξη και τον τύπο μονοκλωνικής πρωτεΐνης (παραπρωτεΐνης — IgG/IgA/IgM με κ ή λ, ή μόνο ελαφρές αλυσίδες Bence Jones στα ούρα) → παραπρωτεϊναιμίες: κακοήθεις (πολλαπλό μυέλωμα, Waldenström), ακαθόριστης σημασίας, δευτεροπαθείς.
Κριτήρια αξιολόγησης: